alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2CRISPR激活质粒(h): sc-401939-ACT

ATP1A2 编码 Na⁺/K⁺-ATPase 的 α2 催化亚基。Na⁺/K⁺-ATPase 是一种位于质膜的 P 型 ATP 酶，通过水解 ATP，将细胞内 Na⁺与细胞外 K⁺进行交换，从而维持对膜电位和离子稳态至关重要的电化学梯度。该活性支持神经元兴奋性、星形胶质细胞对 K⁺ 的缓冲，并将离子转运与影响 Ca²⁺ 处理、细胞体积调控及代谢需求的继发性转运过程相耦联。ATP1A2 的功能通过其对离子梯度的影响与调控突触传递和兴奋性信号的通路发生交汇，因为这些梯度会塑造动作电位恢复及神经递质再摄取。ATP1A2 的遗传破坏或调控异常与多种神经系统表型相关，包括家族性偏瘫型偏头痛 2 型和癫痫易感性，因此它是研究兴奋性机制以及胶质细胞—神经元相互作用的重要节点。

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ATP1A2的表达。

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ATP1A2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ATP1A2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ATP1A2位点，并能够研究内源性位点上依赖于alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ATP1A2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。