alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1CRISPR激活质粒(h): sc-400239-ACT

ATP1A1 编码 Na⁺/K⁺-ATPase 的催化性 α1 亚基。Na⁺/K⁺-ATPase 属于 P 型 ATP 酶，通过在 ATP 依赖的循环中将 Na⁺外排、将 K⁺内运来维持电化学梯度。该泵对膜电位、细胞体积调控以及继发性主动转运至关重要，从而影响营养物质摄取、细胞兴奋性和上皮离子平衡。ATP1A1 还参与与 Src 家族激酶活性相交叉的信号微域，并影响下游与增殖及应激反应相关的通路。Na⁺/K⁺-ATPase 功能失调与心血管、神经系统及肾脏相关病理生理中的离子稳态与信号异常有关，因此 ATP1A1 是在人类细胞中开展机制研究的一个重要靶点。

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ATP1A1的表达。

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ATP1A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ATP1A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ATP1A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ATP1A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。