Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2CRISPR激活质粒(h): sc-400809-ACT

人类 ALDH2 基因编码线粒体乙醛脱氢酶 2（ALDH2），这是一种依赖 NAD(P)+ 的酶，能够将乙醛以及脂质过氧化产生的醛类（例如 4-羟基壬烯醛，4-hydroxynonenal）等反应性醛氧化为相应的酸。通过限制醛类与蛋白质、脂质和 DNA 形成加合物，ALDH2 维持线粒体氧化还原稳态与蛋白质稳态，并支持与 ROS 解毒通路相关的细胞应激反应。ALDH2 活性与乙醇代谢以及在心代谢和神经生物学背景下更广泛的醛清除密切相关；其功能受损会加剧氧化损伤相关信号。遗传变异或 ALDH2 功能降低与酒精相关表型易感性的改变有关，也与涉及线粒体功能障碍和炎症的疾病相关过程有关。

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ALDH2的表达。

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ALDH2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ALDH2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ALDH2位点，并能够研究内源性位点上依赖于Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ALDH2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。