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AGR2双切口酶质粒(m) | sc-423838-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Agr2 编码 anterior gradient 2(AGR2),这是一种驻留于内质网(ER)的、类似蛋白二硫键异构酶的因子,可支持氧化性蛋白折叠并维持分泌通路稳态。AGR2 参与内质网蛋白稳态(proteostasis)相关程序,包括未折叠蛋白反应(UPR)信号以及对拟分泌或定位于膜的客户蛋白的质量控制。通过这些功能,AGR2 会影响在分泌需求高的组织中上皮分化、黏蛋白加工以及细胞—细胞相互作用的动态。AGR2 表达失调已在上皮功能障碍和肿瘤生物学模型中与应激适应及信号改变相关,因此 Agr2 是用于探究内质网应激、蛋白稳态与分泌网络调控的一个有用节点。
AGR2 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Agr2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Agr2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Agr2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Agr2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。