AF-6CRISPR激活质粒(h2): sc-404503-ACT-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- AF-6 CRISPER激活质粒（h2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- AF-6 CRISPR 激活质粒 (h2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 AF-6 CRISPR 激活质粒 (h2) 和 AF-6 CRISPR 激活质粒 (h22) 编码的 gRNA 分别针对 AFDN 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：AF-6: sc-74433，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
AF-6CRISPR激活质粒(h2) | sc-404503-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 AFDN 基因编码连接处支架蛋白 AF-6（afadin），这是一种多结构域衔接蛋白，可将 nectin 家族黏附受体与肌动蛋白细胞骨架连接起来，从而组织黏着连接并维持上皮与内皮屏障的完整性。AF-6 通过整合 Rap1、Ras 等小 GTP 酶的信号来协调细胞骨架重塑与细胞极性，促进细胞接触形成、集体迁移以及组织形态发生中的力学信号转导。AFDN/AF-6 的功能或定位失调与癌症中细胞间黏附改变及侵袭行为相关，而影响连接稳定性的变异也被认为与神经发育和血管表型有关。因此，AFDN 被广泛用于基因编辑与功能基因组学研究，在人类细胞模型中用于探究连接组装、极性网络以及细胞—细胞接触处的信号串扰。
AF-6 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AFDN的表达。
AF-6 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的AFDN基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于AFDN转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性AF-6表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的AFDN位点，并能够研究内源性位点上依赖于AF-6的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AFDN表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟AF-6通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。