ADAM10CRISPR激活质粒(h): sc-400883-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ADAM10 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- ADAM10 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 ADAM10 CRISPR 激活质粒 (h) 和 ADAM10 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 ADAM10 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ADAM10: sc-28358，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ADAM10CRISPR激活质粒(h) | sc-400883-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ADAM10CRISPR激活质粒(h2) | sc-400883-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
ADAM10 编码一种膜锚定型金属蛋白酶，属于 ADAM（去整合素与金属蛋白酶）家族，是负责多种细胞表面蛋白胞外结构域剪切（ectodomain shedding）的主要 α-分泌酶。通过加工 NOTCH 受体/配体、钙黏蛋白（cadherins）、细胞因子受体以及淀粉样前体蛋白等底物，ADAM10 在多种组织中影响细胞命运决定、黏附、迁移以及炎症信号传导。ADAM10 介导的蛋白水解可调控 Notch 信号的动态变化与膜受体的可用性，从而塑造下游转录程序与细胞间通讯。ADAM10 活性失调与信号网络的病理性重塑有关，该重塑涉及神经退行性疾病、肿瘤生物学和免疫失衡，因此 ADAM10 也是研究蛋白酶依赖性通路调控机制的有用靶点。
ADAM10 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ADAM10的表达。
ADAM10 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ADAM10基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ADAM10转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ADAM10表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ADAM10位点，并能够研究内源性位点上依赖于ADAM10的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ADAM10表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ADAM10通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。