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ACSVL6CRISPR激活质粒(h) | sc-405327-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SLC27A5 编码 ACSVL6,这是一种超长链脂酰辅酶A合成酶,可催化长链与超长链脂肪酸在 ATP 依赖下被活化为脂酰辅酶A硫酯。该反应是决定脂肪酸能否被利用的关键“闸门”步骤。通过调控脂酰辅酶A的可用性,ACSVL6 影响多种脂质处理过程,包括 β-氧化、甘油三酯重塑,以及脂质合成与降解通路中的整体代谢通量。脂肪酸活化与脂酰辅酶A代谢的改变与脂质稳态失衡相关,这与影响以肝脏为中心的通路及全身能量平衡的代谢应激状态密切相关。因此,SLC27A5 常用于研究脂质代谢、细胞能量适应以及与代谢性疾病相关的信号通路。
ACSVL6 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC27A5的表达。
ACSVL6 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC27A5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC27A5转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ACSVL6表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC27A5位点,并能够研究内源性位点上依赖于ACSVL6的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC27A5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ACSVL6通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。