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ABP1CRISPR激活质粒(h) | sc-410674-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ABP1CRISPR激活质粒(h2) | sc-410674-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 AOC1 基因编码含铜胺氧化酶 1(amine oxidase copper-containing 1,亦称 ABP1/DAO),这是一种分泌型并与膜相关的酶,可催化组胺、腐胺等生物胺的氧化脱氨作用,生成醛类、氨和过氧化氢。AOC1 通过调控细胞外生物胺水平以及活性氧的产生,影响组织微环境中的炎症信号传导、上皮屏障生物学和氧化还原敏感通路。AOC1 活性或表达的改变与组胺代谢和免疫反应失衡相关,并已在过敏相关炎症、胃肠道黏膜功能以及肿瘤相关基质生物学等情境中得到研究。这些特性使 AOC1 成为研究生物胺分解代谢、氧化应激以及由细胞外代谢物介导的细胞间信号传递机制的有用靶点。
ABP1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AOC1的表达。
ABP1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的AOC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于AOC1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ABP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的AOC1位点,并能够研究内源性位点上依赖于ABP1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AOC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ABP1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。