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ABCA13CRISPR激活质粒(h) | sc-407004-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ABCA13CRISPR激活质粒(h2) | sc-407004-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
ABCA13 编码一种大型 ATP 结合盒(ABC)转运蛋白,参与 ATP 依赖性的脂质跨细胞膜转运,从而支持膜结构组织与细胞内运输。作为 ABCA 亚家族成员,ABCA13 与脂质和胆固醇处理过程相关,这些过程可影响囊泡运输、内体—溶酶体动态以及上皮细胞稳态。已有研究报道 ABCA13 表达在肺部生物学中发生改变,并在与癌症及神经精神疾病相关的数据集中出现关联,促使人们进一步研究由转运蛋白驱动的脂质重塑如何影响信号传导与细胞分化。上述特征使 ABCA13 成为在人源细胞模型中研究脂质转运通路、膜成分依赖的信号传导以及与疾病相关转录程序的有用靶点。
ABCA13 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ABCA13的表达。
ABCA13 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ABCA13基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ABCA13转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ABCA13表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ABCA13位点,并能够研究内源性位点上依赖于ABCA13的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ABCA13表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ABCA13通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。