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A1BGCRISPR激活质粒(h) | sc-403087-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
α-1B-糖蛋白(A1BG)编码一种分泌型血浆糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族,在血液循环中含量丰富,并可在多种组织中检测到。尽管其确切的分子功能尚未完全明确,A1BG 被认为参与细胞外蛋白–蛋白相互作用以及对免疫与炎症过程的调控;已有报道提示其与细胞外环境中的氧化应激及蛋白质稳态(proteostasis)相关信号通路有关。在多种病理背景下均观察到 A1BG 表达改变,包括代谢与炎症状态以及多种癌症,这也支持其作为与生物标志物相关的基因用于机制研究。在人源细胞模型中,扰动 A1BG 可用于探究调控分泌型糖蛋白网络、系统性炎症以及肿瘤相关微环境信号的通路。
A1BG CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性A1BG的表达。
A1BG CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的A1BG基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于A1BG转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性A1BG表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的A1BG位点,并能够研究内源性位点上依赖于A1BG的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在A1BG表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟A1BG通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。