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A1CRISPR激活质粒(h) | sc-416421-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 BCL2A1 基因编码抗凋亡的 BCL-2 家族蛋白 A1。A1 是线粒体外膜的调控因子,通过隔离仅含 BH3 结构域的蛋白并限制 BAX/BAK 介导的线粒体外膜通透化,从而维持细胞存活。A1 可整合来自炎症与应激反应通路的信号(包括依赖 NF-κB 的转录程序),以调节凋亡、细胞生存以及免疫细胞稳态。BCL2A1 在造血细胞谱系中常呈诱导性表达,并可在细胞激活与分化过程中影响其对凋亡刺激的敏感性。BCL2A1 活性与表达的失调与肿瘤生物学及炎症环境中凋亡阈值改变和生存表型相关,为研究细胞命运控制机制提供了依据。
A1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BCL2A1的表达。
A1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BCL2A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BCL2A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BCL2A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于A1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BCL2A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟A1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。