Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
A-Raf Antibody (A-5): sc-166771. Western blot analysis of A-Raf expression in HeLa (A) and SW480 (B) whole cell lysates. Detection reagent used: m-IgGκ BP-HRP: sc-516102.
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A-Raf双切口酶质粒(h): sc-401799-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- A-Raf 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- A-Raf双切酶质粒（h）和A-Raf双切酶质粒（h2）编码针对ARAF的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：A-Raf: sc-166771，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
A-Raf双切口酶质粒(h) | sc-401799-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
A-Raf双切口酶质粒(h2) | sc-401799-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
ARAF 编码丝氨酸/苏氨酸激酶 A‑Raf，是 RAF 家族成员之一，负责将被激活的 RAS 连接到 MAPK/ERK 信号级联通路。通过受调控的激活与二聚化，A‑Raf 促进 MEK 的磷酸化，并进一步调控细胞增殖、分化与生存等程序。ARAF 的活性与生长因子受体信号存在交叉，可影响 ERK 通路内的反馈调节，并与 PI3K–AKT 信号发生串扰。RAF–MEK–ERK 信号的失调（包括 RAF 各同工型使用方式的改变）与肿瘤相关信号网络广泛相关，也有助于在人类细胞中建立情境依赖性的通路依赖模型。
A-Raf 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 ARAF 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ARAF内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏ARAF的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了ARAF基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。