Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
5-LO Antibody (33): sc-136195. Western blot analysis of 5-LO expression in untreated HeLa (A), chemically-treated HeLa (B), K-562 (C), untreated HCT-116 (D) and chemically-treated HCT-116 (E, F) whole cell lysates. β-Actin (C4): sc-47778 used as loading control. Detection reagent used: m-IgG Fc BP-HRP: sc-525409.
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5-LO双切口酶质粒(h): sc-401239-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- 5-LO 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- 5-LO双切酶质粒（h）和5-LO双切酶质粒（h2）编码针对ALOX5的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：5-LO: sc-136195，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
5-LO双切口酶质粒(h) | sc-401239-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
5-LO双切口酶质粒(h2) | sc-401239-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
人类 ALOX5 基因编码 5-脂氧合酶（5-LO），这是一种非血红素铁依赖的双加氧酶，催化花生四烯酸转化为 5-HPETE 和白三烯 A4，从而启动白三烯的生物合成。5-LO 的活性与白三烯 C4 合酶及下游受体信号相互衔接，共同调控炎症水平、白细胞趋化、血管通透性以及支气管平滑肌反应。该酶受钙依赖性的膜转位及其与 FLAP 的相互作用调控，从而将脂质介质的产生与细胞激活状态联系起来。ALOX5/5-LO 信号失调与哮喘和过敏性炎症、动脉粥样硬化以及炎性肿瘤微环境等相关，因此是研究二十碳烷酸（eicosanoid）驱动病理过程的关键节点。
5-LO 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 ALOX5 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ALOX5内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏ALOX5的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了ALOX5基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。