非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
5-LO 抗体（33）：sc-136195。Western blot 分析未处理的 HeLa（A）、化学处理的 HeLa（B）、K-562（C）、未处理的 HCT-116（D）和化学处理的 HCT-116（E、F）全细胞裂解液中 5-LO 的表达。β-肌动蛋白（C4）：sc-47778 用作内参。检测试剂：m-IgG Fc BP-HRP：sc-525409。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
5-LO CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-401239
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- 5-LO CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在5-LO基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：5-LO: sc-136195，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
5-LO CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-401239 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
ALOX5 编码 5-脂氧合酶（5-LO），这是一种非血红素铁依赖的双加氧酶，催化花生四烯酸代谢通路中通向白三烯 A4 的首个关键承诺步骤；白三烯 A4 随后会被转化为具有生物活性的白三烯。5-LO 的活性受细胞内钙离子通量、与 FLAP（ALOX5AP）的膜结合、依赖磷酸化的信号传导以及氧化还原状态调控，从而与先天免疫激活及炎症性脂质介质网络相联系。白三烯通过 CysLT 和 BLT 受体的信号传导会影响白细胞趋化、血管通透性和细胞因子释放，使 ALOX5 处于与哮喘和过敏性炎症、动脉粥样硬化以及肿瘤相关炎症相关的通路之中。ALOX5 表达或通路通量的失调也常被用作机制性读出指标，用于研究氧化应激、巨噬细胞极化，以及类二十烷酸与环氧合酶（COX）来源前列腺素类之间的串扰。
5-LO CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中ALOX5基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对ALOX5基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏ALOX5开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使5-LO蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建ALOX5缺失的细胞模型，用于5-LO信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 5-LO 功能至关重要的 ALOX5 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 ALOX5 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 5-LO CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 5-LO CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 ALOX5 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 5-LO HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 5-LO HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由ALOX5同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定ALOX5靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。