5-LOCRISPR激活质粒(h): sc-401239-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- 5-LO CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- 5-LO CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 5-LO CRISPR 激活质粒 (h) 和 5-LO CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 ALOX5 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：5-LO: sc-136195，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
5-LOCRISPR激活质粒(h) | sc-401239-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
5-LOCRISPR激活质粒(h2) | sc-401239-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 ALOX5 基因编码 5-脂氧合酶（5-LO），这是一种非血红素铁依赖的双加氧酶，催化花生四烯酸转化为白三烯中间体，包括 5-HPETE 和白三烯 A4。该酶促步骤处于白三烯生物合成的核心位置，并通过髓系细胞及其他白细胞群体中的自分泌与旁分泌途径，协调炎症性脂质介质信号传导。5-LO 活性还与二十碳烷酸类（eicosanoid）网络的串扰、钙依赖性激活以及亚细胞定位动态相互关联，从而影响下游细胞因子反应与趋化反应。ALOX5/5-LO 信号失调与炎症性疾病的发生发展及免疫微环境重塑有关，因此是研究免疫代谢与脂质信号机制的重要节点。
5-LO CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ALOX5的表达。
5-LO CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ALOX5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ALOX5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性5-LO表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ALOX5位点，并能够研究内源性位点上依赖于5-LO的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ALOX5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟5-LO通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。