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4E-BP1慢病毒激活颗粒(m) | sc-420149-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 Eif4ebp1 编码 4E-BP1,这是一种对磷酸化敏感的帽依赖性翻译抑制因子,可与 eIF4E 结合并限制 eIF4F 起始复合体的组装。作为 PI3K–AKT–mTOR 通路的经典下游效应分子,4E-BP1 整合营养、生长因子与应激信号,以调节蛋白质合成、细胞生长及代谢程序。mTORC1 介导的磷酸化会释放 eIF4E,从而促进与增殖和生存相关的 mRNA 翻译,将 4E-BP1 与细胞周期进程及适应性应激反应的调控联系起来。4E-BP1 磷酸化失衡以及 eIF4E 可用性的变化,被广泛用作 mTOR 信号异常的生物标志物,见于致癌转化、胰岛素信号缺陷和炎症状态等情境,并为在疾病相关模型中的机制研究提供支持。
4E-BP1 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Eif4ebp1 表达。
4E-BP1 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Eif4ebp1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性4E-BP1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Eif4ebp1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。