3PGDHCRISPR激活质粒(h): sc-401405-ACT

人类 PHGDH 基因编码 3-磷酸甘油酸脱氢酶（3PGDH），它是从头合成丝氨酸生物合成通路的第一个且限速的酶。该通路将糖酵解中间产物 3-磷酸甘油酸分流，用于生成 L-丝氨酸及其下游的一碳代谢。PHGDH 通过调控丝氨酸与甘氨酸库，借助 NADH/NADPH 偶联代谢影响核苷酸合成、甲基化反应以及细胞氧化还原平衡。PHGDH 的失调与增殖状态下的代谢重编程有关，也与神经代谢相关表型相关；在这些情况下，丝氨酸的可用性会限制蛋白质、脂质以及与神经递质相关的生物合成过程。作为连接糖酵解与氨基酸代谢及叶酸循环通量的关键节点，3PGDH 常被用于研究营养依赖性、线粒体—胞质代谢串扰以及应激适应等问题。

3PGDH CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PHGDH的表达。

3PGDH CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PHGDH基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PHGDH转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性3PGDH表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PHGDH位点，并能够研究内源性位点上依赖于3PGDH的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PHGDH表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟3PGDH通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。