ζ-SarcoglycanCRISPR激活质粒(h): sc-410304-ACT

SGCZ 编码人类 ζ-肌聚糖（ζ-sarcoglycan），它是一种跨膜蛋白，属于肌聚糖–肌聚糖伴蛋白（sarcoglycan–sarcospan）复合体，并位于肌营养不良蛋白相关糖蛋白复合体（dystrophin-associated glycoprotein complex, DGC）中，在肌肉收缩过程中起到稳定肌膜（sarcolemma）的作用。通过将细胞骨架与细胞外基质连接起来，ζ-肌聚糖在横纹肌中支持膜完整性与机械信号转导（mechanotransduction）。肌聚糖复合体装配的扰动会影响相关蛋白在肌细胞膜上的定位，并影响与肌纤维损伤相关的下游应激反应。影响肌聚糖组分的遗传改变与遗传性肌病相关，因此，对 SGCZ 调控的研究有助于理解肌营养不良蛋白相关通路以及肌细胞稳态维持机制。

ζ-Sarcoglycan CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SGCZ的表达。

ζ-Sarcoglycan CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SGCZ基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SGCZ转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ζ-Sarcoglycan表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SGCZ位点，并能够研究内源性位点上依赖于ζ-Sarcoglycan的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SGCZ表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ζ-Sarcoglycan通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。