βENaCCRISPR激活质粒(h): sc-401371-ACT

SCNN1B 编码上皮钠通道（ENaC）的 β 亚基（βENaC），是上皮组织顶端膜上阿米洛利敏感性 Na⁺ 转运的核心组成部分。βENaC 与 α、γ 亚基协同作用，支持钠离子重吸收与体液稳态，将离子转运与上皮屏障功能及体积调控通路连接起来。ENaC 活性受蛋白水解加工、泛素依赖性转运（包括 NEDD4L 介导的调控）以及激素响应性信号通路的整合调节，从而精细调控通道的丰度与开放概率。SCNN1B 表达或功能的改变与盐处理异常及气道表面液体调控障碍相关，因此与上皮生理及疾病相关离子转运表型研究密切相关。

βENaC CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SCNN1B的表达。

βENaC CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SCNN1B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SCNN1B转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性βENaC表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SCNN1B位点，并能够研究内源性位点上依赖于βENaC的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SCNN1B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟βENaC通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。