Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
α-gal A CRISPR/Cas9 KO质粒 (m2): sc-419046-KO-2
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- α-gal A CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m2） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在α-gal A基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
α-gal A CRISPR/Cas9 KO质粒 (m2) | sc-419046-KO-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
Gla 编码小鼠 α-半乳糖苷酶 A（α-gal A），这是一种溶酶体外切糖苷酶，负责从糖鞘脂及相关糖缀合物上去除末端 α-半乳糖基残基。该活性通过糖鞘脂降解通路支持溶酶体分解代谢与膜脂稳态，将溶酶体功能与自噬、内吞-溶酶体运输等细胞质量控制过程联系起来。α-gal A 功能受损在经典意义上与糖脂堆积及溶酶体贮积表型相关，因此 Gla 是研究代谢应激反应与细胞器功能障碍的重要靶点。在小鼠模型中，对 Gla 的扰动可用于探究脂质周转改变如何影响炎症、信号传导以及不同细胞类型对溶酶体负荷的易感性。
α-gal A CRISPR/Cas9 KO质粒（m2）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Gla基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Gla基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Gla开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使α-gal A蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Gla缺失的细胞模型，用于α-gal A信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 α-gal A 功能至关重要的 Gla 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Gla 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 α-gal A CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 α-gal A CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Gla 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 α-gal A HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 α-gal A HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Gla同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Gla靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。