αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-419820
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- αA-crystallin CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在αA-crystallin基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：αA-crystallin: sc-28306，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-419820 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
Cryaa 编码 αA-晶状体蛋白（αA-crystallin），这是一种在眼晶状体中含量极高的小分子热休克蛋白，作为不依赖 ATP 的分子伴侣发挥作用，在应激条件下维持晶状体蛋白的可溶性并防止蛋白聚集。除在建立晶状体透明性和屈光特性方面的结构性作用外，αA-晶状体蛋白还可通过与错误折叠的客户蛋白相互作用，并调控与氧化还原平衡和细胞凋亡相关的应激反应网络，从而参与蛋白质稳态维持。CRYAA 表达或功能的改变与晶状体纤维细胞功能障碍、蛋白稳态破坏以及白内障相关表型有关，使其成为研究晶状体发育与年龄相关蛋白聚集过程的关键节点。在小鼠体系中，对 Cryaa 的扰动有助于开展关于伴侣活性、细胞骨架组织以及晶状体上皮细胞和纤维细胞应激韧性的机制研究。
αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Cryaa基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Cryaa基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Cryaa开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使αA-crystallin蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Cryaa缺失的细胞模型，用于αA-crystallin信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 αA-crystallin 功能至关重要的 Cryaa 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Cryaa 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Cryaa 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 αA-crystallin HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 αA-crystallin HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Cryaa同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Cryaa靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。